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PanSpatio™ Caspase-3/7 Activity and Annexin V Dual Apoptosis Assay Kits (NucTrack™ 488 Caspase-3/7, BF™ 647-Annexin V, EthD Gold, Hoechst 33342)

产品货号 产品规格 目录价 库存 数量
C21206 10 T ¥460.00 100
C21206 50 T ¥1500.00 100
C21206 100 T ¥2180.00 100
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效能等同 Biotium NucView® 488 and CF®640R Annexin V Dual Apoptosis Assay Kit for Live Cells（#30037）
NucView®、CF® 640R均是Biotium的商标及注册商标

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实验操作小课堂

  • 问：可以在染色前或染色后使用固定细胞吗？
  • 答：要观察凋亡细胞的不同状态，只能用活细胞诱导凋亡后进行检测。如果将细胞进行固定，细胞在固定过程中将全部死亡，染色结果将出现大量的假阳性凋亡或信号。
  • 问：使用贴壁细胞进行流式检测时为什么要保留培养细胞的培养基？
  • 答：药物处理后的细胞已经存在凋亡细胞，这些细胞的贴壁能力逐渐降低，会游离在培养基中，染色检测时需将这部分细胞考虑进去，否则检测结果中可能凋亡或坏死细胞的比例会比较低，对药物效果或者细胞处理效果的评价会产生错误判断；且细胞培养基中含有的血清能够高效的中和胰酶，残留的胰酶会降解后续染色过程中的Annexin V，导致染色失败。
  • 问：EthDGold相较PI的核心优势有哪些？
  • 答：EthDGold比PI用更低剂量、更高亮度、更严膜筛，给出“更真、更亮、更锐”的死细胞群。
    a.亮度更高：与DNA结合后荧光强度比EthD-I再提升45%，同等曝光下信号更强，拍照或流式检测更敏感。
    b.特异性更好：分子量大、膜通透性要求更严格，仅标记膜严重破损的细胞，不标记“轻度膜渗漏”的晚期凋亡，减少假阳性。
    c.毒性更低：工作浓度可比PI低3–7倍即可达到同等或更高荧光，长时间孵育几乎不引起额外细胞死亡，流式坏死群比例更接近真实。
    d.无RNA干扰：几乎不与RNA结合，无需额外RNase处理，DNA群像更干净，流式直方图CV值更小。
    e.分群更锐利：双参数图上EthDGold阳性群与阴性群间距大，早期/晚期/坏死三界界限清晰，便于gate设定。
    f.兼容固定前检测：虽同样不可固定，但在“活染-上机”流程中信号稳定，固定前拍照/采集不会出现PI常见的洗脱-扩散问题。
  • 问：为什么Caspase-3/7 Inhibitor在我的细胞中没有抑制NucTrack™488染色？
  • 答：Caspase-3/7 Inhibitor是一种可逆的竞争性抑制剂，细胞渗透性有限，可能不足以阻断非常高的Caspase-3/7活性水平。根据我们的经验，抑制剂处理可能会降低NucTrack™染色的细胞荧光强度，但通常不会降低到未经处理的对照细胞的水平。在凋亡诱导之前或之后添加像Z-DEVD-FMK这样的不可逆抑制剂可能更有效地抑制Caspase活性。
  • 问：在进行双重凋亡分析后，能固定细胞吗？
  • 答：可以。建议使用2-4%的对甲醛在室温下固定10-15 min。过度固定可能导致信号减少。为了保留Annexin V染色，应在所有缓冲液中加入1.25 mM CaCl2。不建议使用甲醇固定。NucTrack™488染色可以承受0.1% Triton X-100的通透化处理，以便进行后续的免疫染色，信号强度在通透化和洗涤后可能会降低。Annexin V染色不能承受去污剂通透化。
  • 问：NucTrack™Caspase-3/7底物对Caspase-3/7的特异性如何？
  • 答：与其他Caspase-3/7底物一样，NucTrack™Caspase-3/7底物基于DEVDCaspase-3/7共识序列，该序列也可以被Caspase-7切割。由于Caspases之间底物特异性的重叠，其他Caspases也可能切割DEVD底物。
  • 问：可以使用哪些细胞类型与NucTrack™488 Caspase-3/7 Substrate一起使用？
  • 答：NucTrack™488 Caspase-3/7 Substrate在已发表的科学文献中被报道在多种原代细胞和永生化细胞系中有效。
  • 问：双重凋亡分析能用于组织染色吗？
  • 答：双重凋亡分析不能用于固定细胞或组织切片。我们尚未验证该分析用于活组织染色。

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PanSpatio™ Caspase-3/7 Activity and Annexin V Dual Apoptosis Assay Kits (NucTrack™ 488 Caspase-3/7, BF™ 647-Annexin V, EthD Gold, Hoechst 33342)
PanSpatio™ 活细胞 Caspase-3/7 活性与Annexin V 双重凋亡检测试剂盒

双重凋亡旗舰试剂盒，15 min一步完成Caspase-3/7酶活凋亡+PS外翻凋亡+EthD Gold晚凋/坏死+Hoechst定位细胞

  • 储运条件 4 ℃ 避光保存，冰袋运输
  • 产品简介

    PanSpatio™双重凋亡检测试剂盒整合NucTrack™ 488 Caspase-3/7底物、BF™标记Annexin V、EthD Gold及Hoechst 33342核心组分，打造便捷高效的活细胞凋亡多参数同步检测方案。其核心原理为：底物被凋亡细胞内活化的Caspase-3/7剪切后释放荧光染料，BF™ Annexin V靶向标记早中晚期凋亡细胞，EthD Gold识别晚期凋亡/坏死细胞，Hoechst 33342染色全细胞核作定量内参。相比传统方法需裂解细胞、干扰酶活且无法实时监测的弊端，本试剂盒一步染色仅需15分钟，荧光亮度提升50%，可单细胞动态追踪并同步区分健康、早晚期凋亡、坏死细胞“四态”。兼容流式、荧光显微镜等多平台，能精准解析凋亡异质性，为肿瘤机制研究、药物开发及神经退行性疾病等病理研究提供可靠工具。

  • 应用范围 贴壁细胞或悬浮细胞中细胞凋亡、坏死及健康多维度状态监测；活细胞动态追踪凋亡进程、区分死亡模式；药物开发、疾病机制研究；识别凋亡亚群（如Caspase-3/7高活性但PS未外翻的早期凋亡细胞），解析肿瘤/药物处理后的细胞异质性响应
  • 产品特点

    活细胞免裂解检测：活细胞适用，无需细胞裂解步骤；

    单细胞多维度分析：提供单个细胞的Caspase-3/7活性、PS外翻、坏死及健康状态；

    实时动态追踪：实时捕捉Caspase-3/7活性全程，可逆底物不抑制酶活；

    染料特异性高：杜绝假阳性，EthD Gold仅膜严重破损时进入，排除传统PI“瞬时渗漏”造成的坏死误判，背景干净；

    快速可视化核形态：15 min一步染色，直观地观察到凋亡细胞核的形态变化；

  • 产品参数

    NucTrackTM 488 Caspase-3/7 Substrate Ex/Em：500/530 nm

    BFTM 647-Annexin V Ex/Em：650/665 nm

    BFTM 594-Annexin V Ex/Em：590/617 nm

    Hoechst 33342 Ex/Em：350/461 nm (with DNA)

    EthD Gold Ex/Em：532/625 nm (with DNA)

  • 产品组分

    PanSpatio™ Caspase-3/7 Activity and Annexin V Dual Apoptosis Assay Kits (NucTrack™ 488 Caspase-3/7, BF™ 647-Annexin V, EthD Gold, Hoechst 33342)（C21206）

    组分

    10 T

    50 T

    100 T

    A.NucTrack™ 488 Caspase-3/7 Substrate

    50 μL

    250 μL

    500 μL

    B.BF™ 647-Annexin V

    50 μL

    250 μL

    500 μL

    C.1× Annexin V Binding Buffer

    8 mL

    50 mL*2

    50 mL*4

    D.Caspase-3/7 Inhibitor

    10 μL

    50 μL

    100 μL

    E.Hoechst 33342

    10 μL

    50 μL

    100 μL

    F.EthD Gold

    10 μL

    50 μL

    100 μL

    注：100 T为试剂盒使用次数为进行96孔板荧光显微镜检测时可检测的微孔总数。
  • 结果判读

    1.定性分析（显微镜）：

    图1.PanSpatio™ Caspase-3/7 Activity and Annexin V Dual Apoptosis Assay Kits（以C21206为例）荧光镜检拍照

    （1）阴性组：K562正常细胞，进行NucTrack™ 488 Caspase-3/7 Substrate、BF™ 647-Annexin V、EthD Gold、Hoechst 33342同时共染后合成画Merge；

    （2）阳性组：诱导凋亡处理后的K562细胞，进行NucTrack™ 488 Caspase-3/7 Substrate、BF™ 647-Annexin V、EthD Gold、Hoechst 33342同时共染后合成画面Merge；

    （3）抑制组：诱导凋亡并抑制Caspase-3/7活性处理后的K652细胞，进行NucTrack™ 488 Caspase-3/7 Substrate、BF™ 647-Annexin V、EthD Gold、Hoechst 33342同时共染后合成画面Merge。

    结果判读：在经过凋亡诱导处理后，与阴性对照相比Caspase-3/7活性明显增加（绿色荧光亮度、细胞个数显著增强），磷脂酰丝氨酸（PS）外翻水平显著增加（红色荧光亮度、细胞个数显著增强），EthD Gold信号明显增加，表明Caspase-3/7活性被激活、PS外翻显著、凋亡细胞数量增加。在加入Caspase-3/7 Inhibitor后，与阳性组对比Caspase-3/7活性明显降低（绿色荧光亮度、细胞个数显著降低），PS外翻水平显著降低，但与阴性组对比，抑制组高于阴性组的PS外翻水平及凋亡细胞数，结果表明在抑制Caspase-3/7活性后，会激活其他的凋亡通路。

    注：实际检测结果可能因检测仪器、操作条件、细胞类型等差异产生不同，本示例仅提供参考。

    2. 定量分析（流式细胞仪）：

    图2.PanSpatio™ Caspase-3/7 Activity and Annexin V Dual Apoptosis Assay Kits（以C21206为例）流式细胞术分析

    本实验以K562细胞为样本，以凋亡诱导组为阳性处理组（图2.A、2.B），以未处理组为阴性对照（图2.E、2.F），以凋亡诱导+Caspase-3/7 Inhibitor为阳性抑制组（图2.C、2.D），对K562细胞处理后染色，进行流式上机检测。

    结果判读1：以图A为例：可以区分出活细胞（左下）、早期凋亡细胞（右下）、凋亡晚期细胞（右上）、坏死细胞（左上）；以图B为例可以计算K562细胞的凋亡率（双重验证凋亡：总细胞数减去活细胞数（左下））。

    结果判读2：对K562细胞进行凋亡诱导后，凋亡细胞比例显著高于阴性对照；活细胞比例显著低于阴性对照（见图2.A、图2.E）。通过双重凋亡检验阳性组的凋亡率显著高于对照组（图2.B、图2.F）。在加入Caspase-3/7 Inhibitor后，Caspase-3/7活性明显降低，细胞的凋亡率显著低于阳性组（见图2.B、图2.D），但是又因为有凋亡诱导剂的存在，其他的凋亡通路会被激活。

    注：实际检测结果可能因检测仪器、操作条件等差异产生不同，本示例仅提供参考。
  • 问：可以在染色前或染色后使用固定细胞吗？
  • 答：要观察凋亡细胞的不同状态，只能用活细胞诱导凋亡后进行检测。如果将细胞进行固定，细胞在固定过程中将全部死亡，染色结果将出现大量的假阳性凋亡或信号。
  • 问：使用贴壁细胞进行流式检测时为什么要保留培养细胞的培养基？
  • 答：药物处理后的细胞已经存在凋亡细胞，这些细胞的贴壁能力逐渐降低，会游离在培养基中，染色检测时需将这部分细胞考虑进去，否则检测结果中可能凋亡或坏死细胞的比例会比较低，对药物效果或者细胞处理效果的评价会产生错误判断；且细胞培养基中含有的血清能够高效的中和胰酶，残留的胰酶会降解后续染色过程中的Annexin V，导致染色失败。
  • 问：EthDGold相较PI的核心优势有哪些？
  • 答：EthDGold比PI用更低剂量、更高亮度、更严膜筛，给出“更真、更亮、更锐”的死细胞群。
    a.亮度更高：与DNA结合后荧光强度比EthD-I再提升45%，同等曝光下信号更强，拍照或流式检测更敏感。
    b.特异性更好：分子量大、膜通透性要求更严格，仅标记膜严重破损的细胞，不标记“轻度膜渗漏”的晚期凋亡，减少假阳性。
    c.毒性更低：工作浓度可比PI低3–7倍即可达到同等或更高荧光，长时间孵育几乎不引起额外细胞死亡，流式坏死群比例更接近真实。
    d.无RNA干扰：几乎不与RNA结合，无需额外RNase处理，DNA群像更干净，流式直方图CV值更小。
    e.分群更锐利：双参数图上EthDGold阳性群与阴性群间距大，早期/晚期/坏死三界界限清晰，便于gate设定。
    f.兼容固定前检测：虽同样不可固定，但在“活染-上机”流程中信号稳定，固定前拍照/采集不会出现PI常见的洗脱-扩散问题。
  • 问：为什么Caspase-3/7 Inhibitor在我的细胞中没有抑制NucTrack™488染色？
  • 答：Caspase-3/7 Inhibitor是一种可逆的竞争性抑制剂，细胞渗透性有限，可能不足以阻断非常高的Caspase-3/7活性水平。根据我们的经验，抑制剂处理可能会降低NucTrack™染色的细胞荧光强度，但通常不会降低到未经处理的对照细胞的水平。在凋亡诱导之前或之后添加像Z-DEVD-FMK这样的不可逆抑制剂可能更有效地抑制Caspase活性。
  • 问：在进行双重凋亡分析后，能固定细胞吗？
  • 答：可以。建议使用2-4%的对甲醛在室温下固定10-15 min。过度固定可能导致信号减少。为了保留Annexin V染色，应在所有缓冲液中加入1.25 mM CaCl2。不建议使用甲醇固定。NucTrack™488染色可以承受0.1% Triton X-100的通透化处理，以便进行后续的免疫染色，信号强度在通透化和洗涤后可能会降低。Annexin V染色不能承受去污剂通透化。
  • 问：NucTrack™Caspase-3/7底物对Caspase-3/7的特异性如何？
  • 答：与其他Caspase-3/7底物一样，NucTrack™Caspase-3/7底物基于DEVDCaspase-3/7共识序列，该序列也可以被Caspase-7切割。由于Caspases之间底物特异性的重叠，其他Caspases也可能切割DEVD底物。
  • 问：可以使用哪些细胞类型与NucTrack™488 Caspase-3/7 Substrate一起使用？
  • 答：NucTrack™488 Caspase-3/7 Substrate在已发表的科学文献中被报道在多种原代细胞和永生化细胞系中有效。
  • 问：双重凋亡分析能用于组织染色吗？
  • 答：双重凋亡分析不能用于固定细胞或组织切片。我们尚未验证该分析用于活组织染色。

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    PanSpatio™ Caspase-3/7 Activity and Annexin V Dual Apoptosis Assay Kits (NucTrack™ 488 Caspase-3/7, BF™ 647-Annexin V, Hoechst 33342)
    经典双重凋亡试剂盒，15 min一步完成Caspase-3/7酶活凋亡检测+PS外翻凋亡检测
    货号 规格 目录价 库存
    C21203 10 T 360.00元 100
    C21203 50 T 1350.00元 100
    C21203 100 T 1950.00元 100
    PanSpatio™ Caspase-3/7 Activity and Annexin V Dual Apoptosis Assay Kits (NucTrack™ 488 Caspase-3/7, BF™ 647-Annexin V, EthD Gold)
    双重凋亡升级试剂盒，15 min一步完成Caspase-3/7酶活凋亡+PS外翻凋亡+EthD Gold晚凋/坏死检测
    货号 规格 目录价 库存
    C21205 10 T 360.00元 100
    C21205 50 T 1350.00元 100
    C21205 100 T 1950.00元 100
    PanSpatio™ Caspase-3/7 Activity and Annexin V Dual Apoptosis Assay Kits (NucTrack™ 488 Caspase-3/7, BF™ 594-Annexin V, Hoechst 33342)
    经典双重凋亡试剂盒，15 min一步完成Caspase-3/7酶活凋亡检测+PS外翻凋亡检测
    货号 规格 目录价 库存
    C21204 10 T 360.00元 100
    C21204 50 T 1350.00元 100
    C21204 100 T 1950.00元 100
    摩尔浓度计算器 稀释计算器 分子量计算器
    质量   浓度   体积   分子量 *
    = × ×
    质量   浓度
    = ×
    体积   分子量 *
    ×
    浓度 (start) × 体积 (start) = 浓度 (final) × 体积 (final)
    × = ×
    浓度 (start) × 体积 (start) =
    × =
    浓度 (final) × 体积 (final)
    ×
    分子量：g/mol
    ×
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