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Chromatin Condensation/Plasma-Membrane Permeability/Dead-Cell Apoptosis Detection Kits (Hoechst 33342, YO-PRO™-1, EthD Gold)

产品货号 产品规格 目录价 库存 数量
C21608 10 T ¥59.00 100
C21608 100 T ¥122.00 100
C21608 500 T ¥555.00 100
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效能等同Thermo Fisher Chromatin Condensation/Membrane Permeability/Dead Cell Apoptosis Kit with Hoechst 33342/YO-PRO™-1 and PI for Flow Cytometry（V23201）
本文中YO-PRO®为赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)的商标及注册商标

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实验操作小课堂

  • 问：可以在染色前或染色后使用固定细胞吗？
  • 答：要观察凋亡细胞死细胞和活细胞这三种细胞在同一细胞群中的状态，只能用活细胞。如果将细胞进行固定，细胞在固定过程中将全部死亡，染色结果将出现大量的假阳性凋亡或死细胞的信号。
  • 问：使用贴壁细胞进行流式检测时为什么要保留培养细胞的培养基？
  • 答：药物处理后的细胞已经存在凋亡或死细胞，这些细胞的贴壁能力逐渐降低，会游离在培养基中，染色检测时需将这部分细胞考虑进去，否则检测结果中可能凋亡或死细胞的比例会比较低，对药物效果或者细胞处理效果的评价会产生错误判断；且细胞培养基中含有的血清能够高效的中和胰酶。
  • 问：EthD Gold相较PI的核心优势有哪些？
  • 答：EthD Gold比PI用更低剂量、更高亮度、更严膜筛，给出“更真、更亮、更锐”的死细胞群。
    a.亮度更高：与DNA结合后荧光强度比EthD-I再提升45%，同等曝光下信号更强，拍照或流式检测更敏感。
    b.特异性更好：分子量大、膜通透性要求更严格，仅标记膜严重破损的细胞，不标记“轻度膜渗漏”的晚期凋亡，减少假阳性。
    c.毒性更低：工作浓度可比PI低3-7倍即可达到同等或更高荧光，长时间孵育几乎不引起额外细胞死亡，流式死群比例更接近真实。
    d.无RNA干扰：几乎不与RNA结合，无需额外RNase处理，DNA群像更干净，流式直方图CV值更小。
    e.分群更锐利：双参数图上EthD Gold阳性群与阴性群间距大，早期/晚期/死三界界限清晰，便于gate设定。
    f.兼容固定前检测：虽同样不可固定，但在“活染-上机”流程中信号稳定，固定前拍照/采集不会出现PI常见的洗脱-扩散问题。
  • 问：DAPI和Hoechst染料非常相似，该如何选用？
  • 答：DAPI是一种非常普通的蓝色核复染荧光染料，能对固定和通透的细胞和组织的细胞核进行非常明亮的标记。普遍认为它是介于半通透性到非通透性之间的染色剂，对活细胞的染色效果也不一致。Hoechst 33342染料是细胞通透性染料，与DAPI染色有相似的染色结合机制和荧光颜色；它是活细胞成像的首选，且对固定细胞的标记效果和DAPI一样好。
  • 问：这个染色是孵育10-30 min后就必须马上拍照吗？如果不能马上拍照，最多可以放多久呢？具体应该怎么保存？或者有什么短暂的保存办法吗？
  • 答：染完后尽量1-2小时内检测完，可以暂时置于低温冰浴保存。

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Chromatin Condensation/Plasma-Membrane Permeability/Dead-Cell Apoptosis Detection Kits (Hoechst 33342, YO-PRO™-1, EthD Gold)
染色质浓缩/膜通透性/死细胞凋亡检测试剂盒

细胞全状态10 min快速检测，一次染色解锁健康、凋亡和死亡3种细胞群，适合高通量检测

  • 储运条件 4 ℃避光保存，冰袋运输
  • 产品简介

    本试剂盒是一款基于Hoechst 33342、YO-PRO™-1及EthD Gold三色荧光染料协同作用的高性能凋亡检测工具。其核心原理利用不同膜通透性的染料精准区分细胞状态：Hoechst 33342标记所有细胞核作为定量内参；YO-PRO™-1特异性识别膜通透性增加的凋亡细胞；EthD Gold仅染膜破损的死细胞。 

    相较于传统YO-PRO™-1/PI组合，本产品以EthD Gold替代PI，显著降低背景噪音与非特异性结合，并引入核内参校正，极大提升了复杂样本中检测的精准度与信噪比。产品无需复杂预处理，兼容流式细胞仪、显微镜及微孔板读板仪，特别适用于高通量药物筛选、肿瘤生物学及免疫细胞功能分析，为活细胞、凋亡细胞及死细胞的快速区分与准确定量提供了稳定可靠的解决方案。

  • 应用范围 细胞凋亡机制研究（解析凋亡特征、定量凋亡/坏死比例）、药物研发（高通量药物筛选、药物毒性评估）、肿瘤生物学（肿瘤细胞凋亡机制/治疗效果评估）、免疫细胞功能分析（免疫细胞凋亡水平检测）、疾病机制研究（神经退行性疾病/心血管疾病/自身免疫病相关细胞凋亡分析）
  • 产品特点

    活细胞免固定检测：活细胞适用，无需细胞固定步骤；

    同步检测：同时检测凋亡细胞、死细胞及健康细胞；

    快速可视化核形态：5 min一步染色，直观地观察到凋亡细胞核的形态变化；

    荧光强度优异：EthD Gold荧光强度相比PI高出80%；

    高通量检测：可支撑大规模样本的凋亡快速检测与定量分析；

    高效快速：能高效实现药物作用下细胞凋亡状态的快速评估与毒性效应的快速筛查。

  • 产品参数

    YO-PRO™-1 Ex/Em：491/509 nm；

    EthD Gold Ex/Em：532/625 nm（结合DNA）；

    Hoechst 33342 Ex/Em：350/461 nm（结合DNA）。

  • 产品组分

    组分

    10 T

    100 T

    500 T

    A. 1000× Hoechst 33342

    1.5 μL

    10 μL

    50 μL

    B. 1000× YO-PRO™-1

    1.5 μL

    10 μL

    50 μL

    C. 1000× EthD Gold

    1.5 μL

    10 μL

    50 μL

    注：试剂盒使用次数为进行96孔板荧光显微镜检测时可检测的微孔总数。
  • 结果判读

    1. 定性分析（显微镜）：

    图1. Chromatin Condensation/Plasma-Membrane Permeability/Dead-Cell Apoptosis Detection Kits荧光镜检拍照

    (1) HEK 293正常细胞（阴性组）进行YO-PRO™-1、Hoechst 33342、EthD Gold同时共染后合成画面Merge；

    (2) HEK 293凋亡诱导细胞（阳性组）进行YO-PRO™-1、Hoechst 33342、EthD Gold同时共染后合成画面Merge。

    结果判读：HEK 293正常细胞未被YO-PRO™-1、EthD Gold染色，Hoechst 33342可以将全细胞进行染色。HEK 293经凋亡诱导后，明显出现了凋亡，凋亡细胞被YO-PRO™-1染成绿色；死细胞同时被YO-PRO™-1、EthD Gold染色，展现出绿色荧光与红色荧光重叠。Hoechst 33342将全细胞染成蓝色，可方便记录总数，方便分析凋亡细胞和死细胞的占比。

    2. 定量分析（流式细胞仪）：

    以FSC-SSC构建散点图，来确定细胞群；以YO-PRO™-1为X轴，EthD Gold为Y轴，将完整细胞群分为3个群体：

    图2. Chromatin Condensation/Plasma-Membrane Permeability/Dead-Cell Apoptosis Detection Kits流式细胞术分析

    图例：横坐标为YO-PRO™-1、纵坐标为EthD Gold；区域V：活细胞、区域A：凋亡细胞、区域A-：死细胞。

    结果判读：Human undifferentiated neuroblastoma cell经LPS刺激，在有无姜黄素处理、有无CISD2敲低情况下的凋亡情况经流式细胞仪检测分析。与对照组（未用LPS处理）相比，LPS刺激组的细胞凋亡显著增加，与未接受姜黄素处理的LPS刺激细胞相比，接受姜黄素处理的LPS刺激细胞，其凋亡程度明显更低，与转染siCISD2的结果一致。结果表明姜黄素可减少损伤触发的细胞凋亡，从而发挥保护作用。

    注：实际检测结果可能因检测仪器、操作条件、细胞类型等差异产生不同，本示例仅提供参考。 

    注：图片引自《Protective Effects of CISD2 and Influence of Curcumin on CISD2 Expression in Aged Animals and Inflammatory Cell Model》（DOI:10.3390/nu11030700）

  • 问：可以在染色前或染色后使用固定细胞吗？
  • 答：要观察凋亡细胞死细胞和活细胞这三种细胞在同一细胞群中的状态，只能用活细胞。如果将细胞进行固定，细胞在固定过程中将全部死亡，染色结果将出现大量的假阳性凋亡或死细胞的信号。
  • 问：使用贴壁细胞进行流式检测时为什么要保留培养细胞的培养基？
  • 答：药物处理后的细胞已经存在凋亡或死细胞，这些细胞的贴壁能力逐渐降低，会游离在培养基中，染色检测时需将这部分细胞考虑进去，否则检测结果中可能凋亡或死细胞的比例会比较低，对药物效果或者细胞处理效果的评价会产生错误判断；且细胞培养基中含有的血清能够高效的中和胰酶。
  • 问：EthD Gold相较PI的核心优势有哪些？
  • 答：EthD Gold比PI用更低剂量、更高亮度、更严膜筛，给出“更真、更亮、更锐”的死细胞群。
    a.亮度更高：与DNA结合后荧光强度比EthD-I再提升45%，同等曝光下信号更强，拍照或流式检测更敏感。
    b.特异性更好：分子量大、膜通透性要求更严格，仅标记膜严重破损的细胞，不标记“轻度膜渗漏”的晚期凋亡，减少假阳性。
    c.毒性更低：工作浓度可比PI低3-7倍即可达到同等或更高荧光，长时间孵育几乎不引起额外细胞死亡，流式死群比例更接近真实。
    d.无RNA干扰：几乎不与RNA结合，无需额外RNase处理，DNA群像更干净，流式直方图CV值更小。
    e.分群更锐利：双参数图上EthD Gold阳性群与阴性群间距大，早期/晚期/死三界界限清晰，便于gate设定。
    f.兼容固定前检测：虽同样不可固定，但在“活染-上机”流程中信号稳定，固定前拍照/采集不会出现PI常见的洗脱-扩散问题。
  • 问：DAPI和Hoechst染料非常相似，该如何选用？
  • 答：DAPI是一种非常普通的蓝色核复染荧光染料，能对固定和通透的细胞和组织的细胞核进行非常明亮的标记。普遍认为它是介于半通透性到非通透性之间的染色剂，对活细胞的染色效果也不一致。Hoechst 33342染料是细胞通透性染料，与DAPI染色有相似的染色结合机制和荧光颜色；它是活细胞成像的首选，且对固定细胞的标记效果和DAPI一样好。
  • 问：这个染色是孵育10-30 min后就必须马上拍照吗？如果不能马上拍照，最多可以放多久呢？具体应该怎么保存？或者有什么短暂的保存办法吗？
  • 答：染完后尽量1-2小时内检测完，可以暂时置于低温冰浴保存。

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