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Cell Analyze™ Autophagy/Cytotoxicity Dual-Color Assay Kits (MDC/PI)

产品货号 产品规格 目录价 库存 数量
C21003 100 T ¥175.00 100
C21003 10×100 T ¥1549.00 100
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效能等同Abcam Autophagy/Cytotoxicity Dual Staining试剂盒(ab133075)

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实验操作小课堂

  • 问：染色后大量贴壁细胞脱落，该如何解决？
  • 答：对贴壁能力弱的细胞，提前用多聚赖氨酸、鼠尾胶原或明胶预处理培养板，增强细胞与培养板的吸附力。操作时轻柔加样，避免直接冲击细胞层；洗涤时缓慢倾斜培养板，沿壁加入洗涤液，减少液体流动对细胞的扰动。
  • 问：MDC染色时间（10-60 min）应该如何精确选择？
  • 答：这是一个需要优化的参数。时间过短可能导致信号弱，时间过长则可能增加非特异性染色和背景。建议做法：在正式实验前，先用阳性对照细胞（EBSS饥饿处理）做一个预实验如30 min，再根据预实验结果调整染色时间在10-60 min范围内。通过显微镜观察或流式检测，选择信噪比最高（即阳性信号最强，背景最低）的时间点作为后续实验的标准染色时间。
  • 问：为什么显微镜方案要洗涤3次？
  • 答：显微镜：是直接成像，任何残留的游离染料都会在视野中形成均匀的背景荧光，严重干扰对点状自噬体信号的观察。因此需要严格洗涤3次，以最大化信噪比。
  • 问：阴性对照染色强度高，背景干扰大，该如何排查？
  • 答：阴性对照染色强度高可能与操作步骤不规范（如洗涤次数不足、染色时间过长）或阳性对照设置不当有关。建议严格遵循洗涤步骤，确保MDC染色后至少洗涤3次或更多，以彻底清除残留染料。同时，核对检测仪器参数，确保激发波长为350-380 nm，发射波长为512-532 nm；并设置阳性对照（如经EBSS诱导30 min-4 h的细胞）和空白对照，通过对比验证阴性对照的可靠性。
  • 问：没有观察到预期的荧光，可能是什么原因？如何解决？
  • 答：未观察到预期荧光可能与操作步骤错误、激发光设置不正确或阳性对照设置不当有关。建议仔细核对并确保激发光波长正确，严格按照操作步骤执行实验，并确认阳性对照的设置是否合理（如使用EBSS诱导的细胞）。
  • 问：MDC和PI染色荧光强度均较低，可能是什么原因？
  • 答：可能的原因是细胞密度过低；细胞在处理过程中丢失。

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Cell Analyze™ Autophagy/Cytotoxicity Dual-Color Assay Kits (MDC/PI)
Cell Analyze™ 细胞自噬/细胞毒性双色检测试剂盒（MDC/PI）

10 min零转染 一步法 双重检测细胞自噬、细胞毒性

  • 储运条件 组分A、D在-20 ℃长期避光保存，避免反复冻融，组分B、C在4 ℃保存，冰袋运输
  • 产品简介

    Cell Analyze™ Autophagy/Cytotoxicity Dual-Color Assay Kits (MDC/PI)是细胞自噬与毒性同步检测的便捷工具，核心组分含自噬探针单丹磺酰尸胺（MDC）与细胞死亡标志物碘化丙啶（PI）。其原理为：MDC通过离子捕获机制特异性富集于自噬体，发绿色荧光以可视化自噬；PI可穿透坏死及凋亡晚期细胞的破损细胞膜，使细胞呈红色荧光，实现细胞毒性分析。相较于传统单指标检测方案，本试剂盒无需分开操作，可同步获取两种关键数据，大幅提升实验效率。自噬与细胞凋亡的失衡和癌症、退行性疾病密切相关，该试剂盒为解析细胞存活与死亡的调控机制、筛选相关药物提供可靠支撑，助力生命科学领域的前沿研究。

  • 应用范围

    药物、营养素、缺氧、氧化应激等条件对细胞自噬及细胞毒性的分析

  • 产品特点

    同步双检：一次实验即可检测细胞自噬与细胞毒性，便于探究二者关联；

    多设备适配：染色后可经荧光显微镜实时观察形态，或用酶标仪、流式细胞仪定量分析，满足不同检测需求；

    真实性：MDC对细胞毒性较低，能更接近生理状态下的自噬水平，避免固定或透化处理对细胞结构的破坏；

    实验快速：无需复杂预处理，10 min染色流程简单，节省实验时间；

    操作简便：无需转染，直接对活细胞染色，无需任何转染或稳转株构建；

    结果直观：荧光颜色区分明确，易观察，且支持量化分析，数据清晰易解读。

  • 产品参数

    MDC Stain Ex/Em: 335/512 nm；

    PI Ex/Em: 493/636 nm (without DNA)；

    PI Ex/Em: 535/617 nm(with DNA)。

  • 产品组分

    组分

    100 T

    10×100 T

    A. 10× MDC Stain

    1 mL

    10×1 mL

    B. Stain Buffer

    50 mL

    10×50 mL

    C. Wash Buffer

    100 mL

    10×100 mL

    D. PI

    500 μL

    10×500 μL

    注：100 T为试剂盒组分A（10× MDC Stain）进行96孔板荧光显微镜检测贴壁细胞时可检测的微孔总数。
  • 结果判读

    定性分析（显微镜）：

     

    图1.MDC染色效果图

    检测ZnMet是否能诱导成纤维细胞产生更多自噬体，设置空白对照组、Met组、ZnCL2组、ZnMet组排除单一成分干扰。经MDC探针孵育并通过Nikon confocal A1R采集荧光成像。结果表明ZnMet可激活自噬通路。

    注：图片引自《A novel sprayable thermosensitive hydrogel coupled with zinc modified metformin promotes the healing of skin wound. Bioact Mater.》（doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.06.008.） 

    注：MDC是含有氨基的酸性染料，MDC亦可标记其它酸性细胞器，正常细胞存在基础背景荧光，结果分析时需设对照。

  • 问：染色后大量贴壁细胞脱落，该如何解决？
  • 答：对贴壁能力弱的细胞，提前用多聚赖氨酸、鼠尾胶原或明胶预处理培养板，增强细胞与培养板的吸附力。操作时轻柔加样，避免直接冲击细胞层；洗涤时缓慢倾斜培养板，沿壁加入洗涤液，减少液体流动对细胞的扰动。
  • 问：MDC染色时间（10-60 min）应该如何精确选择？
  • 答：这是一个需要优化的参数。时间过短可能导致信号弱，时间过长则可能增加非特异性染色和背景。建议做法：在正式实验前，先用阳性对照细胞（EBSS饥饿处理）做一个预实验如30 min，再根据预实验结果调整染色时间在10-60 min范围内。通过显微镜观察或流式检测，选择信噪比最高（即阳性信号最强，背景最低）的时间点作为后续实验的标准染色时间。
  • 问：为什么显微镜方案要洗涤3次？
  • 答：显微镜：是直接成像，任何残留的游离染料都会在视野中形成均匀的背景荧光，严重干扰对点状自噬体信号的观察。因此需要严格洗涤3次，以最大化信噪比。
  • 问：阴性对照染色强度高，背景干扰大，该如何排查？
  • 答：阴性对照染色强度高可能与操作步骤不规范（如洗涤次数不足、染色时间过长）或阳性对照设置不当有关。建议严格遵循洗涤步骤，确保MDC染色后至少洗涤3次或更多，以彻底清除残留染料。同时，核对检测仪器参数，确保激发波长为350-380 nm，发射波长为512-532 nm；并设置阳性对照（如经EBSS诱导30 min-4 h的细胞）和空白对照，通过对比验证阴性对照的可靠性。
  • 问：没有观察到预期的荧光，可能是什么原因？如何解决？
  • 答：未观察到预期荧光可能与操作步骤错误、激发光设置不正确或阳性对照设置不当有关。建议仔细核对并确保激发光波长正确，严格按照操作步骤执行实验，并确认阳性对照的设置是否合理（如使用EBSS诱导的细胞）。
  • 问：MDC和PI染色荧光强度均较低，可能是什么原因？
  • 答：可能的原因是细胞密度过低；细胞在处理过程中丢失。

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    Cell Analyze™ Autophagy Green Assay Kits（MDC）
    10 min零转染 一步点亮活细胞自噬体-自噬溶酶体 即刻可见
    货号 规格 目录价 库存
    C21002 100 T 119.00元 100
    摩尔浓度计算器 稀释计算器 分子量计算器
    质量   浓度   体积   分子量 *
    = × ×
    质量   浓度
    = ×
    体积   分子量 *
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    浓度 (start) × 体积 (start) = 浓度 (final) × 体积 (final)
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    浓度 (final) × 体积 (final)
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    分子量：g/mol
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