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MitoBright™ Deep Red FM Mitochondrial Probe

产品货号 产品规格 目录价 库存 数量
C22511 50 μg ¥388.00 100
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效能等同于Thermofisher MitoTracker™ Dyes for Mitochondria Labeling (M22426)
MitoTracker™ 为Thermo Fisher的商标及注册商标

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实验操作小课堂

  • 问：染色后仅观察到细胞核周围弥散状荧光，无法看清线粒体精细结构，如何解决？
  • 答：可能原因及解决方法：
    a. 探针工作浓度过高易导致非特异性染色，建议降低工作液终浓度，优化至20~100 nM之间；
    b. 染色后未充分洗涤导致游离探针残留，建议增加洗涤次数，用37 ℃预热的培养液/PBS洗涤2~3次；
    c. 孵育时间过长导致探针非特异性结合，建议缩短孵育时间至15 min，优化最佳孵育时长；
    d. 细胞状态不佳、线粒体碎片化，建议更换对数生长期的健康细胞重复实验。
  • 问：染色后荧光信号弱、无明显阳性染色，是什么原因？
  • 答：可能原因及解决方法：
    a. 储存液/工作液配制错误、反复冻融导致探针失效，建议重新配制新鲜储存液与工作液，分装保存避免反复冻融；
    b. 探针工作浓度过低，建议适当提高工作液终浓度（最高不超过500 nM）；
    c. 孵育时间过短，建议延长孵育时间至30 min，或37 ℃避光孵育后室温继续孵育10 min；
    d. 细胞线粒体膜电位丧失，探针无法聚集，建议使用健康的活细胞进行实验，设置阳性对照组；
    e. 荧光显微镜/流式细胞仪检测通道设置错误，确认使用Cy5通道，匹配644 nm激发、665 nm射的检测参数。
  • 问：固定通透后荧光信号大幅下降，如何优化？
  • 答：可能的原因有以下几点：
    a. 适当提高活细胞染色时的探针工作浓度，建议使用200~500 nM工作液进行染色；
    b. 延长活细胞染色孵育时间至30~60 min，增强探针与线粒体内蛋白的共价结合效率；
    c. 优化固定条件，避免使用甲醇/丙酮等强穿透性固定剂长时间固定，优先使用4%多聚甲醛37 ℃温和固定15 min；
    d. 降低通透液中Triton X-100浓度，缩短通透时间，减少探针流失。

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MitoBright™ Deep Red FM Mitochondrial Probe
MitoBright™ Deep Red FM 线粒体荧光探针

高特异性深红线粒体探针，活细胞染色稳定，兼容固定通透

  • 储运条件 -20 ℃避光保存，冰袋运输
  • 产品简介

    MitoBright™ Deep Red FM是一款科研专用羰花青类远红光活细胞线粒体荧光探针，可实现线粒体高特异性标记与功能检测。探针含氯甲基官能团，能通过被动运输穿透活细胞膜，特异性富集于活性线粒体，并与线粒体内蛋白巯基共价结合，稳定锚定靶标，同时可灵敏响应线粒体膜电位变化，直观反映线粒体功能与细胞生理状态。 

    相较于TMRM、罗丹明123等传统探针，该产品优势突出：兼容醛类固定与去垢剂处理，无信号流失；激发/发射波长为644 nm/665 nm，无光谱串色，适配多色荧光共染；标记不绝对依赖膜电位，可同步完成线粒体形态观测与功能检测；低毒且操作简便。产品适配荧光共聚焦成像、流式细胞术、高通量药物筛选等平台，可助力细胞凋亡、氧化应激、线粒体调控机制及相关疾病、靶向药物研发等科研工作，有效解决传统探针技术痛点。

  • 应用范围 活细胞线粒体特异性荧光标记与形态学、动态学观察，长时程活细胞线粒体动态成像追踪，固定/通透后样本的线粒体荧光成像与后续抗体标记，多色荧光共染、免疫荧光染色、多细胞器共定位分析
  • 产品特点

    超高特异性：与线粒体内蛋白共价结合，线粒体靶向性强，可清晰分辨线粒体精细网状结构；

    适合多色搭配：Ex/Em=644 nm/665 nm与GFP、RFP等无串色干扰，适配多色荧光实验；

    固定兼容性强：活细胞染色后可耐受4%多聚甲醛固定、Triton X-100通透处理；

    膜电位响应灵敏：线粒体聚集依赖线粒体膜电位，可精准响应膜电位动态变化；

    低浓度无细胞毒性：20 nM即可实现明亮荧光标记，对细胞生理状态影响极小；

  • 产品参数

    外观：蓝色/深蓝色固体；

    Ex/Em：644 nm/665 nm；

    CAS号：873315-86-7；

    分子式：C34H36Cl2N2；

    分子量：543.58；

    分子结构图：

     

    光谱图：

     

  • 产品组分

    组分

    4500 T

    MitoBright™ Deep Red FM Mitochondrial Probe

    50 μg

    注：以96孔板进行检测每孔使用100 μL染色工作液，染色工作液浓度200 nM计算。
  • 结果判读

    定性分析（显微镜）：

    图1. 瘢痕疙瘩成纤维细胞荧光显微成像

    过表达miR-21（mimic组）：线粒体分裂显著减少，细胞内碎片化线粒体数量降低；

    抑制miR-21（inhibitor组）：线粒体分裂显著增加，碎片化线粒体数量大幅上升。

    注：图片引自参考文献《MicroRNA-21 inhibits mitochondria-mediated apoptosis in keloid》(DOI：10.1016/j.celrep.2020.108047)瘢痕疙瘩成纤维细胞分别转染miR-21 mimic、阴性对照(NC)、miR-21 inhibitor、抑制剂阴性对照(INC)，转染12 h后，用MitoBright™ Deep Red FM Mitochondrial Probe对细胞线粒体进行荧光染色，通过荧光显微镜观察线粒体形态并统计碎片化线粒体数量。
  • 问：染色后仅观察到细胞核周围弥散状荧光，无法看清线粒体精细结构，如何解决？
  • 答：可能原因及解决方法：
    a. 探针工作浓度过高易导致非特异性染色，建议降低工作液终浓度，优化至20~100 nM之间；
    b. 染色后未充分洗涤导致游离探针残留，建议增加洗涤次数，用37 ℃预热的培养液/PBS洗涤2~3次；
    c. 孵育时间过长导致探针非特异性结合，建议缩短孵育时间至15 min，优化最佳孵育时长；
    d. 细胞状态不佳、线粒体碎片化，建议更换对数生长期的健康细胞重复实验。
  • 问：染色后荧光信号弱、无明显阳性染色，是什么原因？
  • 答：可能原因及解决方法：
    a. 储存液/工作液配制错误、反复冻融导致探针失效，建议重新配制新鲜储存液与工作液，分装保存避免反复冻融；
    b. 探针工作浓度过低，建议适当提高工作液终浓度（最高不超过500 nM）；
    c. 孵育时间过短，建议延长孵育时间至30 min，或37 ℃避光孵育后室温继续孵育10 min；
    d. 细胞线粒体膜电位丧失，探针无法聚集，建议使用健康的活细胞进行实验，设置阳性对照组；
    e. 荧光显微镜/流式细胞仪检测通道设置错误，确认使用Cy5通道，匹配644 nm激发、665 nm射的检测参数。
  • 问：固定通透后荧光信号大幅下降，如何优化？
  • 答：可能的原因有以下几点：
    a. 适当提高活细胞染色时的探针工作浓度，建议使用200~500 nM工作液进行染色；
    b. 延长活细胞染色孵育时间至30~60 min，增强探针与线粒体内蛋白的共价结合效率；
    c. 优化固定条件，避免使用甲醇/丙酮等强穿透性固定剂长时间固定，优先使用4%多聚甲醛37 ℃温和固定15 min；
    d. 降低通透液中Triton X-100浓度，缩短通透时间，减少探针流失。

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    MitoBright™ DiIC₁‌(5) Mitochondrial Probe
    远红荧光探针，最快15 min 活细胞线粒体膜电位检测
    货号 规格 目录价 库存
    C22312 250 μg 188.00元 100
    摩尔浓度计算器 稀释计算器 分子量计算器
    质量   浓度   体积   分子量 *
    = × ×
    质量   浓度
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    体积   分子量 *
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    浓度 (start) × 体积 (start) = 浓度 (final) × 体积 (final)
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    浓度 (final) × 体积 (final)
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    分子量：g/mol
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