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All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus (Annexin V-R-PE, 7-AAD, Hoechst 33342)

产品货号 产品规格 目录价 库存 数量
C21604 10 T ¥419.00 100
C21604 50 T ¥1366.00 100
C21604 100 T ¥1999.00 100
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实验操作小课堂

  • 问:可以在染色前或染色后使用固定细胞吗?
  • 答:要观察凋亡细胞坏死细胞和活细胞这三种细胞在同一细胞群中的状态,只能用活细胞。如果将细胞进行固定,细胞在固定过程中将全部死亡,染色结果将出现大量的假阳性凋亡或坏死细胞的信号。
  • 问:使用贴壁细胞进行流式检测时为什么要保留培养细胞的培养基?
  • 答:药物处理后的细胞已经存在凋亡或坏死细胞,这些细胞的贴壁能力逐渐降低,会游离在培养基中,染色检测时需将这部分细胞考虑进去,否则检测结果中可能凋亡或坏死细胞的比例会比较低,对药物效果或者细胞处理效果的评价会产生错误判断;且细胞培养基中含有的血清能够高效的中和胰酶,残留的胰酶会降解后续染色过程中的Annexin V,导致早期凋亡染色失败,出现假阴性结果。
  • 问:为什么检测时细胞总数量与预期相差较大,晚期凋亡和坏死细胞占比远远低于预期?
  • 答:凋亡诱导或者药物处理后的细胞,进入凋亡阶段或者坏死之后,细胞形态与结构会和正常细胞产生差异,特别是坏死细胞可能由于细胞膜破裂内容物弥散,与正常细胞差异巨大;在实验中进行细胞离心和清晰过程中容易保留在上清中被丢弃,可能导致最终的细胞总数远少于预期,晚期凋亡和坏死细胞数量少于预期;可以再细胞离心后保留少量上清,避免吸走疏松的细胞沉淀。
  • 问:同样作为死细胞染料,为什么选择EthD Gold而不选择PI进行标记?
  • 答:EthD Gold在与PI具有相同的染色结果的基础上,表现出更具有选择性的优势:
    a.亮度更高:与DNA结合后荧光强度比EthD-I再提升45%,同等曝光下信号更强,拍照或流式检测更敏感。
    b.特异性更好:分子量大、膜通透性要求更严格,仅标记膜严重破损的细胞,不标记“轻度膜渗漏”的晚期凋亡,减少假阳性。
    c.毒性更低:工作浓度可比PI低3-7倍即可达到同等或更高荧光,长时间孵育几乎不引起额外细胞死亡,流式坏死群比例更接近真实。
    d.无RNA干扰:几乎不与RNA结合,无需额外RNase处理,DNA群像更干净,流式直方图CV值更小。
    e.分群更锐利:双参数图上EthD Gold阳性群与阴性群间距大,早期/晚期/坏死三种界限清晰,便于gate设定。
    f.兼容固定前检测:虽同样不可固定,但在“活染-上机”流程中信号稳定,固定前拍照/采集不会出现PI常见的洗脱-扩散问题。

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All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus (Annexin V-R-PE, 7-AAD, Hoechst 33342)
All-in-One 凋亡、坏死和健康细胞全状态检测试剂盒加强版

经典早凋检测,7-AAD比PI发射光谱更狭窄,干扰更小,在多色荧光中是PI的最佳替代品

  • 储运条件 4 ℃避光保存,冰袋运输
  • 产品简介 All‑in‑One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus (Annexin V‑R‑PE, 7‑AAD, Hoechst 33342)是一款集成化细胞状态检测工具,采用“磷脂酰丝氨酸(PS)外翻+膜完整性评估+全细胞核染色”多参数荧光标记策略,可同步区分并量化健康细胞、凋亡细胞与坏死细胞。其检测原理互补:Annexin V‑R‑PE特异性结合凋亡细胞外翻的PS,呈现橙红色荧光;7‑AAD穿透破损细胞膜结合坏死/晚期凋亡细胞DNA,产生深红色荧光;Hoechst 33342蓝色染料对全细胞核染色,作为计数内参。相较于传统单一标记试剂盒,本品优势显著:同一体系同步检测避免样本分批次误差,流式细胞仪象限分析可直观区分四类细胞,兼容荧光显微镜形态学观察,适合动态追踪凋亡进程及量化细胞比例。产品应用广泛,覆盖细胞生理状态基础研究、抗癌药/抗菌肽疗效评估、肿瘤细胞凋亡机制解析及临床样本辅助检测等场景,能为疾病机制研究、药物筛选及临床预后判断提供可靠数据,助力基础研究向临床应用高效转化。
  • 应用范围 贴壁细胞或悬浮细胞中凋亡细胞、坏死细胞、健康细胞检测;肿瘤研究、药物毒性评价、干细胞分化监控等领域,尤其适合动态追踪凋亡进程(如化疗药物诱导的细胞死亡模式)
  • 产品特点 全状态同步检测:一次实验覆盖凋亡、坏死、健康细胞状态,避免传统单一标记局限性,实现“三合一”精准区分;
    高效省时:整体染色时间仅需15 min,远快于传统多步检测流程,大幅提升实验效率染色时间;
    荧光强度优异:BF™ 488荧光量子产率高,光稳定性强,确保凋亡细胞信号清晰;
    高特异性与灵敏度:EthD Gold比PI或EthD-I更强的DNA结合亲和力和荧光量子产率,减少假阳性;
    操作简便性:一步染色即可完成多参数检测,无需复杂预处理,结果可直接通过流式散点图或显微图像量化;
  • 产品参数 BF™ 488-Annexin V Ex/Em:490/515 nm;
    EthD Gold Ex/Em:532/625 nm(with DNA);
    FITC-Annexin V Ex/Em:494/518 nm;
    Annexin V-R-PE Ex/Em:488/578 nm;
    7-AAD Ex/Em:549/648 nm;
    Draq 7 Ex/Em:599~644/678~697 nm;
    Annexin V-APC Ex/Em:650/660 nm;
    Hoechst 33342 Ex/Em:350/461 nm(with DNA)。
  • 产品组分

    组分

    10 T

    50 T

    100 T

    A. 1× Annexin V Binding Buffer

    5 mL

    50 mL×2

    50 mL×4

    B. Annexin V-R-PE

    50 μL

    250 μL

    500 μL

    C. 7-AAD

    10 μL

    50 μL

    100 μL

    D. Hoechst 33342

    10 μL

    50 μL

    100 μL

    注:试剂盒使用次数为进行96孔板荧光显微镜检测时可检测的微孔总数。 

    注:试剂盒C21604建议用于流式细胞仪检测。

  • 结果判读

    1. 定性分析(显微镜):

    图1.All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus(以C21206为例)荧光镜检拍照

    (1)阴性对照:K562正常细胞,进行Annexin V-APC(A)、7-AAD(B)、Hoechet 33342(C)共染后合成画面(D);

    (2)阳性对照:诱导凋亡处理后K562细胞,Annexin V-APC(E)、7-AAD(F)、Hoechet 33342(G)共染合成画面(H)。

    结果判读:

    早期凋亡细胞:细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻(PS)显著(Annexin V-APC远红荧光信号强);

    膜破损的凋亡晚期细胞:Annexin V-APC远红荧光+7-AAD红色荧光+Hoechet 33342蓝色荧光;

    坏死细胞:仅7-AAD红色荧光信号;

    健康细胞:红/远红荧光双阴性,蓝色细胞核荧光均匀染色。

    在经过凋亡诱导处理后,与阴性对照相比PS外翻水平显著增加(远红荧光亮度、细胞个数显著增强),表明细胞膜PS外翻显著。晚期凋亡细胞比例明显增加(远红荧光/红色荧光强度/蓝色荧光、三阳细胞个数显著增多),表明药物促进了细胞的凋亡进而导致细胞死亡。


    2. 定量分析(流式细胞仪):

    以FSC-SSC构建散点图,来确定细胞群,再以Hoechst 33342-SSC构建散点图,排除细胞碎片;以Annexin V-APC为X轴,7-AAD为Y轴,将完整细胞群分为4个群体:

    图2.All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus(以C21206为例)流式细胞术分析

    本实验以K562细胞为样本,以凋亡诱导组为阳性处理组(图2.A),以未处理组为阴性对照(图2.B),对K562细胞处理后染色,进行流式上机检测。

    结果判读1:以图2.A为例:可以区分出健康细胞(左下)、早期凋亡细胞(右下)、晚期凋亡(右上)、坏死细胞(左上)。

    结果判读2:对K562细胞进行凋亡诱导后,凋亡细胞的比例显著高于阴性对照;健康细胞比例显著低于阴性对照(见图2.A、图2.B)。

    通过比较阳性组与阴性组在一、四象限的占比,分析药物或者基因是促进细胞凋亡还抑制凋亡。数据大于对照组就是促进凋亡,小于对照组则为抑制凋亡。

    注:实际检测结果可能因检测仪器、操作条件、细胞类型等差异产生不同,本示例仅提供参考。
  • 问:可以在染色前或染色后使用固定细胞吗?
  • 答:要观察凋亡细胞坏死细胞和活细胞这三种细胞在同一细胞群中的状态,只能用活细胞。如果将细胞进行固定,细胞在固定过程中将全部死亡,染色结果将出现大量的假阳性凋亡或坏死细胞的信号。
  • 问:使用贴壁细胞进行流式检测时为什么要保留培养细胞的培养基?
  • 答:药物处理后的细胞已经存在凋亡或坏死细胞,这些细胞的贴壁能力逐渐降低,会游离在培养基中,染色检测时需将这部分细胞考虑进去,否则检测结果中可能凋亡或坏死细胞的比例会比较低,对药物效果或者细胞处理效果的评价会产生错误判断;且细胞培养基中含有的血清能够高效的中和胰酶,残留的胰酶会降解后续染色过程中的Annexin V,导致早期凋亡染色失败,出现假阴性结果。
  • 问:为什么检测时细胞总数量与预期相差较大,晚期凋亡和坏死细胞占比远远低于预期?
  • 答:凋亡诱导或者药物处理后的细胞,进入凋亡阶段或者坏死之后,细胞形态与结构会和正常细胞产生差异,特别是坏死细胞可能由于细胞膜破裂内容物弥散,与正常细胞差异巨大;在实验中进行细胞离心和清晰过程中容易保留在上清中被丢弃,可能导致最终的细胞总数远少于预期,晚期凋亡和坏死细胞数量少于预期;可以再细胞离心后保留少量上清,避免吸走疏松的细胞沉淀。
  • 问:同样作为死细胞染料,为什么选择EthD Gold而不选择PI进行标记?
  • 答:EthD Gold在与PI具有相同的染色结果的基础上,表现出更具有选择性的优势:
    a.亮度更高:与DNA结合后荧光强度比EthD-I再提升45%,同等曝光下信号更强,拍照或流式检测更敏感。
    b.特异性更好:分子量大、膜通透性要求更严格,仅标记膜严重破损的细胞,不标记“轻度膜渗漏”的晚期凋亡,减少假阳性。
    c.毒性更低:工作浓度可比PI低3-7倍即可达到同等或更高荧光,长时间孵育几乎不引起额外细胞死亡,流式坏死群比例更接近真实。
    d.无RNA干扰:几乎不与RNA结合,无需额外RNase处理,DNA群像更干净,流式直方图CV值更小。
    e.分群更锐利:双参数图上EthD Gold阳性群与阴性群间距大,早期/晚期/坏死三种界限清晰,便于gate设定。
    f.兼容固定前检测:虽同样不可固定,但在“活染-上机”流程中信号稳定,固定前拍照/采集不会出现PI常见的洗脱-扩散问题。
  • 本资料源自公开学术渠道,如需转载或引用,请联系原文作者获取授权。本页面内容仅作学术参考,不代表任何商业推荐或合作。

    All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus (BF™ 488-Annexin V, Draq 7, Hoechst 33342)
    适配携带RFP红色荧光客户,15 min一步染色,同步量化解锁细胞全状态(凋亡、坏死、健康三色分明)
    货号 规格 目录价 库存
    C21607 10 T 369.00元 100
    C21607 50 T 1289.00元 100
    C21607 100 T 1866.00元 100
    All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus (Annexin V-APC, 7-AAD, Hoechst 33342)
    适配GFP绿色荧光客户,15 min一步染色,同步量化解锁细胞全状态(凋亡、坏死、健康三色分明)
    货号 规格 目录价 库存
    C21606 10 T 419.00元 100
    C21606 50 T 1366.00元 100
    C21606 100 T 1999.00元 100
    All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus (Annexin V-R-PE, Draq 7, Hoechst 33342)
    新手友好款,无需调整补偿,Hoechst成像定位所有细胞,15 min一步染色,同步量化解锁细胞全状态(凋亡、坏死、健康三色分明)
    货号 规格 目录价 库存
    C21605 10 T 419.00元 100
    C21605 50 T 1366.00元 100
    C21605 100 T 1999.00元 100
    All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus (FITC-Annexin V, EthD Gold, Hoechst 33342)
    经典凋亡检测升级款、EthD Gold代替PI,易溶不赌管、高亮、假阳性低,Hoechst成像定位所有细胞
    货号 规格 目录价 库存
    C21603 10 T 338.00元 100
    C21603 50 T 1207.00元 100
    C21603 100 T 1723.00元 100
    All-in-One Apoptotic, Necrotic and Healthy Comprehensive Cell Status Kits Plus (BF™ 488-Annexin V, EthD Gold, Hoechst 33342)
    升级款凋亡检测,BF™ 488代替FITC亮度更高,不易淬灭、EthD Gold代替PI,易溶不赌管、高亮、假阳性低
    货号 规格 目录价 库存
    C21602 10 T 369.00元 100
    C21602 50 T 1289.00元 100
    C21602 100 T 1866.00元 100
    BF™ 594-Annexin V/Hoechst 33342 Apoptosis Kits
    15 min一步双染,红蓝双光同步成像计数,精准鉴定健康、凋亡细胞
    货号 规格 目录价 库存
    C21407 10 T 256.00元 100
    C21407 50 T 899.00元 100
    C21407 100 T 1350.00元 100
    质量   浓度   体积   分子量 *
    = × ×
    质量   浓度
    = ×
    体积   分子量 *
    ×
    浓度 (start) × 体积 (start) = 浓度 (final) × 体积 (final)
    × = ×
    浓度 (start) × 体积 (start) =
    × =
    浓度 (final) × 体积 (final)
    ×
    分子量:g/mol
    ×
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